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摘要

01

目的

探讨五子衍宗丸对化疗后肿瘤生长及由化疗引起的疲劳的作用及机制。

02

方法

建立荷4T1乳腺癌小鼠模型，并将其随机分为TC组、PTX组、WZYZ组、WZYZ＋PTX组。给药21d，处死小鼠后检测小鼠脏器指数及肌肉超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）水平。

03

结果

WZYZ组、WZYZ＋PTX组小鼠的力竭游泳时间显著延长，与TC组比较，WZYZ＋PTX组、PTX组的瘤重均显著减轻；WZYZ＋PTX组的肿瘤体积显著变小。与PTX组比较，WZYZ＋PTX组小鼠的胸腺指数显著升高，且SOD值明显升高，MDA浓度明显降低。

04

结论

五子衍宗丸具有提高紫杉醇化疗敏感性、减轻化疗相关性疲劳的作用。其作用机制可能与调节免疫，抑制氧化应激损伤等作用有关。

关键词乳腺肿瘤；化疗；疲劳；五子衍宗丸；免疫；氧化应激

乳腺癌是全球最常见的肿瘤之一。据年的统计数据，乳腺癌占所有恶性肿瘤的23％，占肿瘤死亡率的14％［1］。因术后高复发率及高转移率，以紫杉醇（paclitaxel，PTX）［2］为主的化疗在乳腺癌的综合治疗中占有重要地位，但PTX化疗时或化疗后所导致的最常见的副作用之一———肿瘤化疗相关性疲劳［3］以及PTX的耐药性严重影响了患者的治疗及生活质量［4］，限制了其在临床中的应用。近年来有研究表明五子衍宗丸具有增强机体免疫力［5］的作用，其主要组成药物枸杞子［6］与五味子［7］均有抗肿瘤等作用。

本研究拟在乳腺癌小鼠模型上进行五子衍宗丸的抗肿瘤及抗疲劳实验，探讨其对PTX的化疗敏感性及化疗相关性疲劳的影响及机制。

1材料与方法

1.1

药品与试剂

RPMI-培养液（吉诺生物公司产品，批号）；

胎牛血清（Hyclon公司产品，批号nvj）；

0．25％胰蛋白酶（Solarbio公司产品，批号）；

PTX注射液（哈尔滨三联药业有限公司，批号C03）；

戊巴比妥钠（北京化学试剂公司，批号：）。

1.2

细胞4T1乳腺癌细胞株购于中科院上海细胞所

1.3

实验动物

7周龄SPF级雌性BALB／c小鼠60只，体重16～20g［由南方医科大学实验动物中心提供，许可证号：SCXK（粤）-）］。实验前小鼠适应性喂养7d，室温22～26℃，相对湿度40％～60％，明暗交替12h，自由饮水、采食。

1.4

方法

1．4．1细胞培养

4T1细胞用含10％胎牛血清的RPMI-培养液培养。取对数生长期细胞，用0．25％胰酶消化，1∶3传代。置37℃，5％CO2培养箱中培养。

1．4．2荷瘤小鼠模型的建立与分组

取对数生长期的4T1乳腺癌细胞，经胰酶消化后，用PBS调整细胞浓度为1×cells／mL，在小鼠右侧腹壁第4对乳房脂肪垫区域的皮下接种肿瘤细胞0．1mL，相当于cells／只小鼠。当瘤块长到50～mm3（接种后第7天）的时候，按瘤体积随机分为5组，每组10只。分别为正常对照（NC）组、肿瘤对照（TC）组、PTX组、WZYZ组、WZYZ＋PTX组。1．4．3给药剂量与方法参考药物等效剂量公式和文献［8］，设定五子衍宗丸的给药剂量为1．5g／kg，灌胃，每天1次。PTX的给药剂量为10mg／kg，腹腔注射，每2天1次。分组后开始给药，即每天9：00给药，给药体积为20mL／kg，连续21d。NC组和TC组给予相应体积的生理盐水。

1．4．4观测指标

取分好组的50只小鼠，测定小鼠疲劳程度。具体方法：于给药前、给药后的第10、20天，用7％体重的铅坠系于小鼠尾部，将小鼠放入水温（25±1）℃的游泳箱（高30cm，直径25cm）中进行力竭游泳测试，并记录力竭游泳时间。各组小鼠自接受治疗开始，每3天用游标卡尺测量肿瘤最长径（L）及与其垂直的宽径（W），并计算肿瘤体积，肿瘤体积（mm3）＝0．52×L×W2。在末次给药1h后，用3％戊巴比妥钠麻醉小鼠，摘眼球采血。剥离瘤块、脾脏、胸腺并称重，切取两侧后腿腓肠肌。按对应的每只小鼠的体重计算脏器指数。脏器指数＝脏器重量（mg）／体重（g）。用硫代巴比妥酸法测定丙二醛（MDA）含量，超氧化物歧化酶（SOD）测定采用黄嘌呤氧化酶法。所有操作均按照试剂盒说明书进行。

1.5

统计学方法

选用SPSS13．0软件进行数据统计分析，结果均以x±s表示，采用单因素方差分析进行统计分析，经方差齐性检验，方差不齐使用近似F检验（Welch法），统计检验水准为α＝0．05。

2结果

2.1

五子衍宗丸对荷瘤小鼠的抗疲劳作用

如表1所示，干预第10天时，与NC组比较，TC组、PTX组、WZYZ＋PTX组小鼠的力竭游泳时间显著缩短；干预20d时，与PTX组比较，NC组、WZYZ组、WZYZ＋PTX组小鼠的力竭游泳时间显著延长。

2.2

五子衍宗丸对荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作

用WZYZ＋PTX组、PTX组的瘤重较TC组均显著减轻（P＜0．01）；WZYZ＋PTX组瘤重较PTX组显著减轻（P＜0．05）。如图1所示，WZYZ＋PTX组的肿瘤体积较TC组显著减小（P＜0．05）。WZYZ＋PTX组、WZYZ组和PTX组3组小鼠的抑瘤率分别为33．66％、7．16％和20．65％。

2.3

脏器指数

如表2示。脾指数：与NC组比较，TC组、PTX组、WZYZ组和WZYZ＋PTX组的脾指数均显著升高。胸腺指数：与NC组比较，TC组、PTX组、WZYZ组和WZYZ＋PTX组的胸腺指数显著下降。与TC组比较，PTX组的胸腺指数显著下降。与PTX组比较，WZYZ组、WZYZ＋PTX组小鼠的胸腺指数显著升高。

2.4

荷瘤小鼠肌肉MDA含量和SOD活性

如图2所示，PTX组SOD活性较TC组与NC组均明显降低，WZYZ＋PTX组的SOD活性与NC组比较明显降低，但较PTX组明显升高。与TC组及NC组比较，PTX组MDA浓度明显升高，WZYZ＋PTX组的MDA浓度与NC组比较明显升高，但较PTX组明显降低。

3讨论

PTX是临床重要的一、二线化疗药物［9－10］，因其耐药及副作用，目前其对妇科乳腺癌的化疗有效率仅为40％～80％［11］。药理学研究表明，五子衍宗丸有调节免疫功能、抗衰老、抗氧化等作用［5］，其中枸杞子［6］、五味子还具有抗癌作用［7］。本实验中WZYZ和PTX联合用药组的抗肿瘤作用显著提高，其肿瘤抑制率达到33．66％，WZYZ组未显示抗肿瘤作用。说明WZYZ和PTX联合用药起到的抗肿瘤作用不是协同作用，而是WZYZ增强了小鼠乳腺癌对PTX的敏感性。实验结果还表明，荷瘤小鼠的脾指数较NC组小鼠显著升高；荷瘤小鼠的胸腺指数较NC组小鼠显著降低；WZYZ＋PTX组小鼠的胸腺指数较PTX组显著升高。胸腺和脾脏是重要的免疫器官，上述结果表明WZYZ的这种增敏作用可能与其提高荷瘤小鼠化疗后下降的免疫力相关。

肿瘤化疗相关性疲劳是患者化疗时主要的不适症状之一，其发生机制尚不完全明确，目前现代西医学缺乏效果明确的干预措施。最近有关研究表明，运用中医药手段对肿瘤化疗相关性疲劳进行干预有较好效果。本实验结果表明，与PTX组比较，WZYZ＋PTX组小鼠的力竭游泳时间显著延长。说明WZYZ在应用PTX化疗的基础上能显著缓解由PTX所引起的小鼠游泳能力的下降。另外，我们还发现，五子衍宗丸可明显升高应用PTX化疗的荷瘤小鼠肌肉SOD活性并降低其MDA浓度。

MDA与SOD之间的平衡遭到破坏，会使体内的MDA不断聚积，氧自由基的增加可能导致肌肉细胞的凋亡引起肌肉的功能失调出现疲劳［12］。因此，我们推断化疗药物引起的氧化应激损伤可能是肿瘤患者出现疲劳的潜在机制之一。

综上所述，WZYZ具有提高PTX化疗的敏感性并减轻化疗相关性疲劳的作用，其作用机制可能与其调节免疫，抑制氧化应激损伤等作用有关。应进一步进行临床相关实验加以验证。

4参考文献

[1]FerlayJ，ShinHR，BrayF，etal．Estimatesofworldwideburdenofcancerin：GLOBOCAN［J］．IntJCancer，，（12）：－．

[2]RowinskyEK，DonehowerRC．Paclitaxel（taxo1）［J］．NEndJMed，，（15）：4－．

[3]LinosE，SpanosD，RosnerBA，etal．EffectsofreproductiveanddemographicchangesonbreastcancerincidenceinChina：amodelinganalysis［J］．JNatlCancerInst，，（19）：－．

[4]GuptaD，LisCG，GrutschJF．Therelationshipbetweencancer-relatedfatigueandpatientsatisfactionwithqualityoflifeincancer［J］．JPainSymptomManage，，34（1）：40－47．

[5]杨阿民，刘保兴，张圣强，等．五子衍宗丸改善肾精亏虚大鼠支持细胞功能的机理研究［J］．北京中医药大学学报，，33（6）：－，．

[6]朱燕飞．枸杞子药理作用概述［J］．浙江中西医结合杂志，，15（5）：－．

[7]史琳，王志成，冯叙桥．五味子化学成分及药理作用的研究进展［J］．药物评价研究，，34（3）：－．

[8]LuoT，WangJ，YinY，etal．（－）-Epigallocatechingallatesensitizesbreastcancercellstopaclitaxelinamurinemodelofbreastcarcinoma［J］．BreastCancerRes，，12（1）：R8．

[9]陈斯泽，陈雪梅，丁颖，等．多西紫杉醇、卡培他滨和顺铂联合方案治疗转移性鼻咽癌的研究［J］．南方医科大学学报，，31（7）：－．

[10]游敏玲，罗满芳，廖蔚茜，等．柴芪益肝颗粒联合紫杉醇抑制裸鼠肝癌生长的在体成像研究［J］．南方医科大学学报，，32（7）：－．

[11]沈镇宙．乳腺肿瘤学［M］．上海：上海科技出版社，：－

[12]ChenY，JungsuwadeeP，VoreM，etal．Collateraldamageincancerchemotherapy：Oxidativestressinnontargetedtissues［J］．MolInterv，，7（3）：－．

本文内容转自《实用医学杂志年第29卷第11期》，内容仅供分享交流之用，如涉侵权，请留言告知，我们会及时处理。

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长按







































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